Albumina sierica bovina
L'albumina sierica bovina (nota anche come BSA o "Frazione V" ) è una proteina sierica dell'albumina derivata dalle mucche. Viene spesso usato come standard di concentrazione proteica negli esperimenti di laboratorio.
Il soprannome "Frazione V" si riferisce all'albumina che è la quinta frazione dell'originale metodologia di purificazione di Edwin Cohn che utilizzava le caratteristiche di solubilità differenziale delle proteine plasmatiche. Manipolando le concentrazioni di solvente, il pH, i livelli di sale e la temperatura, Cohn è stato in grado di estrarre "frazioni" successive di plasma sanguigno. Il processo è stato inizialmente commercializzato con albumina umana per uso medico e successivamente adottato per la produzione di BSA.
Proprietà
La proteina precursore della BSA a lunghezza intera è di 607 aminoacidi (AA) di lunghezza. Un peptide di segnale N-terminale a 18 residui viene tagliato dalla proteina precursore al momento della secrezione, quindi il prodotto proteico iniziale contiene 589 residui di aminoacidi. Altri sei aminoacidi vengono suddivisi per produrre la proteina BSA matura che contiene 583 aminoacidi.
| peptide | Posizione | Lunghezza (AA) | MW Da |
|---|---|---|---|
| Precursore integrale | 1 - 607 | 607 | 69.324 |
| Peptide di segnale | 1 - 18 | 18 | 2.107 |
| propeptide | 19 - 24 | 6 | 478 |
| Proteine mature | 25 - 607 | 583 | 66.463 |
Proprietà fisiche di BSA:
- Numero di residui di amminoacidi: 583
- Peso molecolare: 66.463 Da (= 66.5 kDa)
- punto isoelettrico in acqua a 25 ° C: 4.7
- Coefficiente di estinzione di 43.824 M − 1cm − 1 a 279 nm
- Dimensioni: 140 × 40 × 40 Å (ellissoide prolato dove a = b c)
- pH dell'1% Soluzione: 5,2-7
- Rotazione ottica: 259: -61 °; 264: -63 °
- Raggio di Stokes (rs): 3,48 nm
- Costante di sedimentazione, S20, W × 1013: 4.5 (monomero), 6.7 (dimero)
- Costante di diffusione, D20, W × 10−7 cm2 / s: 5.9
- Volume specifico parziale, V20: 0.733
- Viscosità intrinseca, η: 0,0413
- Rapporto di attrito, f / f0: 1,30
- Incremento dell'indice di rifrazione (578 nm) × 10−3: 1.90
- Assorbanza ottica, A279 nm1 g / L: 0.667
- Rotazione media del residuo, 233: 8443
- Ellitticità residua media: 21,1 209 nm; 20,1 222 nm
- A-elica stimata,%: 54
- B-form stimato,%: 18
applicazioni
La BSA ha numerose applicazioni biochimiche tra cui ELISA (dosaggio immunoassorbente enzimatico), immunoblot e immunoistochimica. Poiché la BSA è una proteina piccola, stabile, moderatamente non reattiva, viene spesso utilizzata come bloccante nell'immunoistochimica. Durante l'immunoistochimica, che è il processo che utilizza anticorpi per identificare gli antigeni nelle cellule, le sezioni di tessuto sono spesso incubate con bloccanti di BSA per legare siti di legame non specifici. Questo legame di BSA con siti di legame non specifici aumenta la possibilità che gli anticorpi si leghino solo agli antigeni di interesse. Il bloccante BSA migliora la sensibilità diminuendo il rumore di fondo poiché i siti sono coperti con la proteina moderatamente non reattiva. Durante questo processo, la minimizzazione del legame non specifico degli anticorpi è essenziale per acquisire il rapporto segnale-rumore più elevato. La BSA è anche usata come nutriente nella coltura cellulare e microbica. Nei digestori di restrizione, la BSA viene utilizzata per stabilizzare alcuni enzimi durante la digestione del DNA e per prevenire l'adesione dell'enzima alle provette di reazione, alle punte delle pipette e ad altri vasi. Questa proteina non influenza altri enzimi che non ne hanno bisogno per la stabilizzazione. La BSA è anche comunemente usata per determinare la quantità di altre proteine, confrontando una quantità sconosciuta di proteine con quantità conosciute di BSA (si veda il saggio sulle proteine di Bradford). La BSA viene utilizzata per la sua capacità di aumentare il segnale nei test, la sua mancanza di effetto in molte reazioni biochimiche e il suo basso costo, poiché grandi quantità di esso possono essere prontamente purificate dal sangue bovino, un sottoprodotto dell'industria del bestiame. Un altro uso di BSA è che può essere usato per isolare temporaneamente sostanze che bloccano l'attività dell'enzima necessario, impedendo così la reazione a catena della polimerasi (PCR). La BSA è stata ampiamente utilizzata come modello per sintetizzare le nanostrutture.
